产品描述

 Hieff Trans® siRNA/miRNA体外转染试剂是一种非脂质体PEI阳离子、两性分子转染试剂，为siRNA转染到哺乳动物细胞中而开发。适用于siRNA和miRNA的转染。这种转染试剂包裹siRNA或miRNA形成阳离子复合物，该复合物与细胞表面带负电的蛋白聚糖相互作用吸附在细胞表面，通过内吞进入细胞，形成内含体。该转染试剂具有质子海绵的作用，能够吸收溶酶体中的H+，质子的不断流入，导致复合体肿胀破裂，从而使外源siRNA或miRNA释放到细胞质中。
该产品可在广泛的细胞系中，实现1 nM的siRNA超过90%的表达效率，避免了脱靶效应。适用于多种细胞转染，包括Hela、MCF-7、HepG2、CHO等贴壁细胞；以及难以转染的悬浮细胞系，如K562或THP-1细胞，可达到80%的沉默效率；同时还包括一些原代细胞，原代人成纤维细胞和原代人肝细胞等，可达到80%的沉默效率。

运输与保存方法
 
冰袋（wet ice）运输。产品2-8 ℃保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项
 
1）整个实验过程使用无RNA酶和无热原性的材料，如离心管、枪头、缓冲液。
2）转染前，确保siRNA是经过PAGE纯化和脱盐处理过的，高纯度的siRNA或者miRNA有助于获得较高的转染效率。
3）PEI阳离子转染试剂应该在2-8 ℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，否则可能会导致PEI挥发，降低转染效率。
4）转染前一天，确保接种贴壁细胞密度在30%-50%左右，对于一些小细胞和生长缓慢的细胞，接种密度可适当扩大2倍。
5）转染前，确保siRNA/miRNA基因沉默表达不会影响细胞活力。
6）该产品只适合体外转染，不能用于体内转染。
7）本产品仅作科研用途！

操作流程
 
一．贴壁细胞转染（以24孔板和转染1 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表1）
接种贴壁细胞
1.为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，接种细胞密度建议30%-50%左右，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。
2.按照以下体系配制siRNA-PEI或miRNAPEI子核酸转染试剂阳离复合物： 
1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释8.4 ng siRNA (0.6 pmoles)，混匀。
2）立刻向100 μL的siRNA中加入2 μL的转染试剂，旋涡10秒，充分混匀。
3）在室温下孵育10 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
【注】：孵育时间不要超过30min
4）在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入500 μL新鲜预热的完全培养基。
5）直接将100 µL siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。最终体积为600 µL ，siRNA终浓度为1 nM。
6）37 ℃，5% CO2培养箱培养，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24-72 h，蛋白表达水平在48-96 h。
 
图1 转染贴壁细胞操作流程

【注】：由于靶基因、细胞类型、siRNA效价、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周转率等因素，均会影响siRNA的转染效率。建议选取siRNA浓度在1 nM到10TUNEology 波长可调检测卡盒-->