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同型对照是什么？
A
同型对照 (Isotype control) 是一种与一抗保持相似特性但缺乏特异性靶标的抗体。在流式实验中，同型对照作为阴性对照，可以区分特定抗体信号与非特异性背景染色，能够排除干扰因素以确保实验结果的准确性。同型对照还可以用于设定流式细胞仪的电压，并有效节约实验成本。
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产生背景染色的原因？
A
图1. HepG2 和 A549 细胞通过使用抗体 Caspase-3 (bs-0081R-FITC) 进行流式细胞检测，蓝色为空白对照，黄色为同型对照，绿色为特异性一抗。流式实验中根据同型对照设置阴性阈值。
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什么情况下应使用同型对照？
A
同型对照也不是适用于所有情况。同型对照仅能检测不由表位引起的非特异性结合，而相似表位不同抗原，或不同表位相同抗原产生的交叉反应就不能被同型对照检测。在以下情况中，实验人员应使用同型对照以确保流式实验的准确性：
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如何选择同型对照？
A
在实验中选择的同型对照需要与一抗的特性相匹配。合适的同种型对照应与一抗的宿主种族、Ig亚型、偶联物、轻链和工作浓度相同。在流式实验中，选择合适的同型对照可以有效排除干扰因素，实现更精确的数据分析。而选用 PBS 作为空白对照则达不到同样的效果，甚至可能误导试验结果。
流式检测中的常用同型对照
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抗体名称 |
标记荧光素 |
货号 |
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Mouse IgG1 |
FITC |
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PE |
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PerCP |
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Mouse IgG2a |
FITC |
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PE |
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PerCP |
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Mouse IgG2b |
FITC |
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PE |
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PerCP |
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Mouse IgG |
FITC |
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PE |
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APC |
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AF488 |
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AF594 |
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AF647 |
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CY3 |
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CY5 |
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Rat IgG |
FITC |
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PE |
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APC |
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AF488 |
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AF594 |
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AF647 |
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CY3 |
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CY5 |
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Rat IgG |
FITC |
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PE |
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APC |
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AF488 |
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AF594 |
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AF647 |
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